微生物检测过程中的细节问题
一、稀释液的制作磷酸盐缓冲稀释液
贮存液：
磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g；蒸馏水500mL；用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2（图1-1、1-2），用蒸馏水稀释至1000
mL后贮存于冰箱。
稀释液：
用蒸馏水稀释1.25ml贮存液至1000mL，分装于合适容器，121℃高压灭菌15min。
二、培养基制作
①计算出所需数量，用电子称、称量纸、药勺来称取。
②放入比所用蒸馏水大的烧瓶中，使之充分混匀于蒸馏水后加热溶解并煮沸。
×备注：即使是同一培养基，各个厂家的配制方法多少有些不同，所以一定要充分参照培养基上的说明。
2.1倾注培养培养基：
·平板计数琼脂等：高压灭菌后保存，使用时加温溶解。·去氧胆酸盐琼脂培养基：使用时将培养基粉未加温溶解。
*备注：倾注培养时，向培养基分注的步骤参照下述的注意事项：
①样液稀释以及从接种到培养基混合完毕，最好在15分钟以内完成。
②每个平皿的分注量约15-20ml。分注后将平皿倾斜和旋转使之充分混合，但要注意不要让培养基从平皿内溢出，且不要粘附在平皿壁和盖上。
③分注时三角烧瓶挂有培养基滴时，下一次分注的培养基可能被烧瓶外壁的细菌污染，所以要用酒精棉擦拭，再将瓶口用火焰灭菌。
2.2平板培养基：
平板培养基是将溶解后的培养基分注15-20ml到无菌平皿里，使之凝固。
·TCBS琼脂培养基、DHL琼脂培养基；加温溶解后，分注、凝固、干燥表面。为了防止沉淀的发生，加温溶解后要充分混匀（注意不要起泡）。
·EMB琼脂培养基：高压灭菌后，分注、凝固、干燥表面。
·卵黄甘露醇高盐琼脂培养基：将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右，用酒精棉（纱布）擦拭蛋壳表面，打开鸡蛋取出卵黄。加入经高压灭菌后冷却到55-60℃培养基里（6%卵黄）搅拌摇匀凝固后干燥表面（搅拌时不要起泡）。若培养基温度过高，卵黄凝固，过低则培养基分注时开始结块，所以操作要迅速。
*备注：分注后将平皿盖打开置于无菌工作台/恒温培养箱内使培养基表面干燥。
干燥时间基准如下：
无菌超净台：15分钟；
37C恒温箱内倒置：20-30分钟。
深圳市贝斯通标准技术有限公司可依据国家标准或行业标准，为客户提供各种微生物的检测及技术咨询服务。
