微生物检测过程中的细节问题
一、稀释液的制作磷酸盐缓冲稀释液
贮存液:
磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g;蒸馏水500mL;用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2(图1-1、1-2),用蒸馏水稀释至1000
mL后贮存于冰箱。
稀释液:
用蒸馏水稀释1.25ml贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。
二、培养基制作
①计算出所需数量,用电子称、称量纸、药勺来称取。
②放入比所用蒸馏水大的烧瓶中,使之充分混匀于蒸馏水后加热溶解并煮沸。
×备注:即使是同一培养基,各个厂家的配制方法多少有些不同,所以一定要充分参照培养基上的说明。
2.1倾注培养培养基:
·平板计数琼脂等:高压灭菌后保存,使用时加温溶解。·去氧胆酸盐琼脂培养基:使用时将培养基粉未加温溶解。
*备注:倾注培养时,向培养基分注的步骤参照下述的注意事项:
①样液稀释以及从接种到培养基混合完毕,最好在15分钟以内完成。
②每个平皿的分注量约15-20ml。分注后将平皿倾斜和旋转使之充分混合,但要注意不要让培养基从平皿内溢出,且不要粘附在平皿壁和盖上。
③分注时三角烧瓶挂有培养基滴时,下一次分注的培养基可能被烧瓶外壁的细菌污染,所以要用酒精棉擦拭,再将瓶口用火焰灭菌。
2.2平板培养基:
平板培养基是将溶解后的培养基分注15-20ml到无菌平皿里,使之凝固。
·TCBS琼脂培养基、DHL琼脂培养基;加温溶解后,分注、凝固、干燥表面。为了防止沉淀的发生,加温溶解后要充分混匀(注意不要起泡)。
·EMB琼脂培养基:高压灭菌后,分注、凝固、干燥表面。
·卵黄甘露醇高盐琼脂培养基:将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右,用酒精棉(纱布)擦拭蛋壳表面,打开鸡蛋取出卵黄。加入经高压灭菌后冷却到55-60℃培养基里(6%卵黄)搅拌摇匀凝固后干燥表面(搅拌时不要起泡)。若培养基温度过高,卵黄凝固,过低则培养基分注时开始结块,所以操作要迅速。
*备注:分注后将平皿盖打开置于无菌工作台/恒温培养箱内使培养基表面干燥。
干燥时间基准如下:
无菌超净台:15分钟;
37C恒温箱内倒置:20-30分钟。
深圳市贝斯通标准技术有限公司可依据国家标准或行业标准,为客户提供各种微生物的检测及技术咨询服务。